Fermentacja i zastosowania hodowli komórkowych obejmują przygotowanie płynnych i gazowych podaży do fermentora lub bioreaktora w celu wsparcia wzrostu pożądanych komórek. Konieczne jest utrzymanie sterylności zarówno w podażach płynnych, jak i gazowych, aby wspierać wzrost pożądanych komórek podczas procesu fermentacji. Aby spełnić wymagania dotyczące sterylności, aplikacja filtracji odgrywa istotną rolę.
W tym artykule omówiono różne zastosowania filtracji w procesie fermentacji. Typowa aplikacja filtracji powietrza do filtracji powietrza jest tutaj zilustrowana.
Przedsiewne filtrowanie powietrza wlotowego:
Sprężarki powietrza są używane do generowania przepływu powietrza dla zakładu produkcyjnego. Istnieją dwa rodzaje sprężarek: bezolejowe i olejowe.
Prezfiltracja powietrza wlotowego staje się konieczna do usunięcia kropelek oleju w sprężarce powietrza smarowanym olejem. Filtr koalescencyjny, taki jak filtr z włókna szklanego, może zapewnić usuwanie oleju w ponad 99,9% oraz usunąć krople wody (rosę) w szerszym zakresie. Ten filtr z włókna szklanego działa również jako doskonały przedfiltr dla filtrów fałdowych z membraną hydrofobową, które głównie służą do sterylizacji powietrza wlotowego do fermentora.
Dla sprężarek bezolejowych, filtr wstępny służy do usuwania zanieczyszczeń z systemu powietrza i przedłuża żywotność końcowego filtra. Do użytku z powietrzem fermentacyjnym stosuje się filtr z fałdą celulozową i filtry polipropylenowe do tego zastosowania.
Filtracja powietrza sterylizowanego:
Bakterie i bakteriofagi, gdy są obecne w powietrzu, mogą dostać się do zbiorników fermentacyjnych lub bioreaktorów i zanieczyścić produkt. Może to zniszczyć pożądane komórki produkcyjne i zmniejszyć wydajność. Dlatego dostarczenie tego sterylnego powietrza jest kluczowe dla procesu fermentacji.
Istnieje kilka metod rozważanych do sterylizacji powietrza doprowadzanego do fermentora. Obejmują one filtrację, ciepło, napromieniowanie, mycie środkami sterylizującymi oraz elektrostatyczną precipitację. Mycie i elektrostatyczna precipitacja nie są skuteczne w usuwaniu mikroorganizmów. Ciepło i napromieniowanie nie są tanie. Dlatego filtracja jest jedyną techniką, która spełnia wszystkie wymagania dotyczące sterylizacji powietrza doprowadzanego do fermentora.
Hydrofobowe filtry fałdowe są powszechnie zalecane w tym przypadku. Hydrofobowa (odpychająca wodę) natura tych membran może zapewnić usuwanie bakterii i bakteriofagów z 100% efektywnością w warunkach wilgotnych lub suchych. Jest to kluczowa korzyść w porównaniu z włóknem szklanym i wkładami.
Do pewnych procesów fermentacji wymagane jest wysoko podgrzane filtrowane powietrze. W tym celu filtr wykonany jest z używanego inherentnie hydrofobowego PTFE.
Napowietrzanie:
Sparging działa na równomierne rozprowadzenie powietrza w fermentorze lub bioreaktorze zawierającym podłoże wzrostu i produkt. W tym zastosowaniu używane są porowate elementy spargingowe ze stali nierdzewnej, które zapewniają jednolite i drobne rozproszenie gazu tlenowego. Te elementy ze stali nierdzewnej są wykonane z jednej strony z metalu porowatego, a z drugiej strony z metalu stałego.
Drobne stopnie porowatej stali nierdzewnej (tj. 3,0 µm) są idealne nawet dla wrażliwych na ścinanie hodowli komórek ssaków ze względu na ich wysoką zdolność do transferu gazu i niskie właściwości aeracyjne.
Filtracja powietrza wylotowego/gazów odpadowych:
Celem filtra wentylacyjnego na sterylnym zbiorniku fermentacyjnym jest podwójny;
Aby zapobiec zanieczyszczeniu zbiornika i zapewnić zawartość materiału wewnątrz zbiornika. Zapobieganie zanieczyszczeniom w zbiorniku jest pożądane dla procesów, które wymagają długich cykli fermentacji lub wrażliwego medium fermentacyjnego (np. medium do hodowli tkankowej).
Aby zapobiec uwalnianiu organizmów z zbiornika fermentacyjnego i ochronić środowisko oraz zapobiec ucieczce mikroorganizmów z zbiornika fermentacyjnego.
System filtracji spalin dla fermentora/bioreaktora rekombinowanego lub ssaka musi odprowadzać do środowiska powietrze sterylne i zapewniać barierę sterylności, aby zapobiec dostaniu się zanieczyszczeń. Ponadto musi być możliwe do sterylizacji parą in situ i zazwyczaj ma czyste ciśnienie różnicowe mniejsze niż 1 psid.
Zalecany projekt systemu filtracji spalin w dwóch etapach.
Przedsiewnik (zwykle 1,2 μm wkład filtra polipropylenowego): Usuwa aerozolizowane cząstki i krople cieczy zawierające komórki lub podłoże hodowlane z gazów odpadowych fermentacji lub powietrza wydmuchu i przedłuża żywotność końcowego filtra sterylizującego.
Hydrofobowa wkładka filtracyjna z membraną (PVDF lub PTFE) o średnicy 0,2 μm: Zapobiega organizmom przedostawaniu się do lub opuszczaniu strefy kontrolowanej, nawet w obecności kropel wody i nasyconego gazu.
Filtracja surowców płynnych:
Fermentacja i media do wzrostu hodowli komórek są często sterylizowane przez filtrację, zwłaszcza gdy obecne są składniki wrażliwe na ciepło. Filtr sterylizujący z membraną hydrofilową o potencjale zeta dodatnim 0.xn--2-m-yyc jest szeroko stosowany do tych zastosowań. Pozytywny potencjał zeta membrany hydrofilowej zwiększa usuwanie endotoksyn bakteryjnych (pirogenów) z wody do podawania.
Filtry polipropylenowe są również doskonałym wyborem do wstępnego filtrowania agresywnych rozpuszczalników i lepkich płynów, a także do zastosowań wymagających wysokich przepływów.